Phase II validation study of the rK39 ELISA prototype for the diagnosis of canine visceral leishmaniasis in Brazil / Estudo de validação da fase II do teste ELISA rK39 para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina no Brasil / Estudio de validación de la fase II del test ELISA rK39 para el diagnóstico de la leishmaniasis visceral canina en Brasil

Abstract: Dogs are the main reservoirs in the domestic transmission cycle of visceral leishmaniasis, and the diagnosis is essential for the effectiveness of the control measures recommended by the Brazilian Ministry of Health. We assessed the diagnostic performance of the ELISA-Vetlisa/BIOCLIN prototype with serum samples from 200 dogs, in triplicate, including symptomatic, oligosymptomatic, asymptomatic, and healthy dogs, originated by two distinct panels (A and B) characterized by parasitological tests as the reference standard. In this study, the prototype kit showed a 99% sensitivity (95%CI: 94.5-100.0) and a 100% specificity (95%CI: 96.4-100.0). The sensitivity of the prototype kit did not vary significantly with the clinical status of the dogs. Considering the final result classification (positive or negative), agreement between the results of repeated tests was almost perfect (kappa = 0.99; 95%CI: 0.98-1.00). ELISA-Vetlisa/BIOCLIN is a promising option for the serological diagnosis of canine visceral leishmaniasis in Brazil.

Resumo: Os cães são os principais reservatórios do ciclo de transmissão domiciliar da leishmaniose visceral, e o diagnóstico é essencial para a efetividade das medidas de controle recomendadas pelo Ministério da Saúde. Os autores avaliam o desempenho diagnóstico do protótipo da ELISA-Vetlisa/BIOCLIN em amostras sorológicas de 200 cães, em triplicata, incluindo cães sintomáticos, oligossintomáticos e saudáveis, com dois painéis distintos (A e B) caracterizados por testes parasitológicos enquanto referência. No estudo, o kit-protótipo mostrou sensibilidade de 99% (IC95%: 94,5-100,0) e especificidade de 100% (IC95%: 96,4-100,0). A sensibilidade do kit-protótipo não variou de maneira significativa de acordo com o estado clínico dos cães. Considerando a classificação final dos resultados (positivo ou negativo), a concordância entre os resultados dos testes em triplicata foi quase perfeita (kappa = 0,99; IC95%: 0,98-1,00). O protótipo ELISA-Vetlisa/BIOCLIN tem o potencial de ser utilizada para o diagnóstico sorológico da leishmaniose visceral canina no Brasil.

Resumen: Los perros son los principales reservorios en el ciclo de transmisión doméstica de la leishmaniasis visceral, por ello el diagnóstico es esencial para la efectividad de las medidas de control recomendadas por el Ministerio de Salud de Brasil. Evaluamos el desempeño diagnóstico de ELISA-Vetlisa/BIOCLIN prototipo con muestras de sérum de 200 perros, en triplicado, incluyendo sintomático, oligosintomático, asintomático y perros sanos, originadas por dos paneles distintos (A y B), caracterizados por test parasitológicos como referencia estándar. En este estudio, el kit prototipo mostró un 99% de sensibilidad (IC95%: 94,5-100,0) y un 100% de especificidad (IC95%: 96,4-100,0). La sensibilidad del kit prototipo no varió significativamente con el estatus clínico de los perros. Considerando la clasificación final del resultado (positiva o negativa), el acuerdo entre los resultados de los tests repetidos fue casi perfecto (kappa = 0,99; IC95%: 0,98-1,00). ELISA-Vetlisa/BIOCLIN tiene potencial para ser usado para el diagnóstico serológico de la leishmaniasis visceral canina en Brasil.

Circulation of spotted fever group rickettsiae among dogs seropositive for Leishmania spp. in an urban area of Brazil

Abstract INTRODUCTION: Dogs play an epidemiological role in several vector-borne diseases that affect human and animal health worldwide. We aimed to identify rickettsial circulation among dogs with canine visceral leishmaniasis (CVL) from a region endemic for both diseases. METHODS: CVL-seropositive dogs were screened for spotted fever group rickettsiae using an indirect immunofluorescence assay. RESULTS: Among the CVL-positive dogs, anti-Rickettsia rickettsii antibodies were identified in one asymptomatic and one oligosymptomatic dog. CONCLUSIONS: This study shows low circulation of antibodies to R. rickettsii in CVL-seropositive dogs. It is recommended that surveillance studies in dogs should continue in order to monitor this scenario.

Parasite load, iNOS and cytokine profiles, and histopathological aspects of Leishmania infantum infection in dogs with different clinical presentations / Carga Parasitária, iNOS, citocinas e histopatologia na infecção por Leishmania infantum em cães com apresentações clínicas distintas

ABSTRACT: Visceral leishmaniasis (VL) is a zoonotic disease with a canine urban reservoir in South America. Dogs from an endemic area within Brazil, which were naturally infected with Leishmania infantum, and those presenting severe clinical (SC), mild, or no clinical (MNC) disease, were evaluated. Parasite load, histopathology, and cytokine and iNOS mRNA expressions were assessed in the spleen and liver in order to determine the potential markers for disease susceptibility or resistance. As a result, dogs with both SC and MNC had high parasite loads; IFN-γ was the most expressive cytokine in both organs, along with IL-6 and IL-4 being detected in the spleen and liver, and IL-10 only in liver. The hepatic tissue presented higher medians for IFN-γ and IL-10, and was the main organ to produce cytokines with hepatic IL-10 suggesting a regulatory follow up. Granulomas were detected in both organs; however, when absent in spleen, they were associated with elevated IL-6 levels, thus highlighting the anti-inflammatory role of IL-6. Microscopic lesions in the spleen were predominantly characterized by an extensively disorganized white pulp and splenic response was suggested as sub optimized. Parasite load, tissue damage, and immunological response may vary in the dogs with similar clinical symptoms, which may not be a good parameter for assessing the animal's susceptibility to VL.

RESUMO: A Leishmaniose visceral (LV) é uma doença zoonótica com reservatório canino na América do Sul. Cães oriundos de área endemica brasileira, naturalmente infectados por Leishmania infantum, apresentando doença clínica severa (CS) ou doença branda ou ausente (BA) foram avaliados. Carga parasitária, histopatologia e expressão de mRNA de citocinas e iNOS foram analisados em baço e fígado, buscando determinar possíveis marcadores de susceptibilidade ou resistência à doença. Como principais resultados, tanto cães CS como BA apresentaram alta carga parsitária. IFN-γ foi a citocina mais expressiva em ambos os órgãos, sendo IL-6 e IL-4 também detectadas em baço e fígado e IL-10 em fígado. No tecido hepático foram encontradas as maiores medianas de IFN-γ e IL-10, sendo o fígado o principal órgão produtor de citocinas, com IL-10 sugerindo acompanhamento regulatório. Granulomas foram detectados em ambos os órgãos. Quando de sua ausência no baço, essa foi associada à elevação dos níveis de IL-6, salientando o papel anti-inflamatório dessa citocina. Alterações microscópicas foram principalmente caracterizadas por extensiva desorganização de polpa branca, com a resposta esplência sendo sugerida como subotimizada. Carga parasitária, dano tecidual e resposta immune variaram mesmo em cães com quadros clínicos similares, não sendo, portanto, a análise clínica um bom parâmetro para avaliação de susceptibilidade animal à LV.

Fatores ambientais associados à ocorrência de leishmaniose visceral canina em uma área de recente introdução da doença no Estado do Rio de Janeiro, Brasil / Factores ambientales asociados a la ocurrencia de leishmaniosis visceral canina en un área de reciente introducción de la enfermedad en el estado de Río de Janeiro, Brasil / Environmental factors associated with canine visceral leishmaniasis in an area with recent introduction of the disease in the State of Rio de Janeiro, Brazil

Resumo: Foi avaliada a associação entre características ambientais obtidas por sensoriamento remoto e a prevalência da leishmaniose visceral canina (LVC) no bairro do Jacaré, área de recente introdução da doença, no Município de Niterói, Estado do Rio de Janeiro, Brasil. Trata-se de um estudo seccional para avaliação da prevalência de LVC, definida por meio da positividade no teste imunocromatográfico rápido em dupla plataforma (dual path platform - DPP), confirmada com o ensaio imunoenzimático (EIE). Foram incluídos 97 cães com prevalência de LVC de 21,6%. Houve maior frequência de LVC em cães com a convivência com outro cão, gambá, mico e ouriço-terrestre, assim como com a história de remoção de outros cães com LVC do domicílio. Na análise multivariada, ajustada por sexo e idade do cão, cães residentes em áreas com maior cobertura de vegetação esparsa apresentaram prevalência da infecção por Leishmania infantum cinco vezes maior do que aqueles que residiam em áreas menos vegetadas (OR = 5,72; IC95%: 1,47-22,20). Por outro lado, áreas mais urbanizadas caracterizadas como comerciais ou residenciais carentes, identificadas pelo sensoriamento remoto como aquelas com alta densidade de estruturas cinza, estiveram associadas à menor ocorrência da LVC (OR = 0,09; IC95%: 0,01-0,92). A maior prevalência de infecção em cães convivendo com outros animais silvestres e em áreas com maior cobertura vegetal, associada com menor prevalência em áreas urbanizadas, indica um padrão rural de transmissão da LVC nessa área.

Resumen: Se evaluó la asociación entre las características ambientales obtenidas por teledetección y la prevalencia de la leishmaniosis visceral canina (LVC) en el barrio de Jacaré, área de reciente introducción de la enfermedad, en el municipio de Niteroi, Estado de Río de Janeiro, Brasil. Se trata de un estudio seccional para la evaluación de la prevalencia de LVC, definida mediante la positividad en el test inmunocromatográfico rápido en una plataforma de doble vía (dual path platform - DPP), confirmada con un ensayo imunoenzimático (EIE). Se incluyeron a 97 perros con una prevalencia de LVC de un 21,6%. Hubo una mayor frecuencia de LVC en perros que conviven con otros perros, zarigüeyas, monos y erizos terrestres, así como con el historial de retirada de otros perros con LVC del domicilio. En el análisis multivariado, ajustado por sexo y edad del perro, los perros residentes en áreas con una mayor cobertura de vegetación muy dispersa presentaron una prevalencia de infección por Leishmania infantum cinco veces mayor que aquellos que residían en áreas con menos vegetación (OR = 5,72; IC95%: 1,47-22,20). Por otro lado, las áreas más urbanizadas, caracterizadas como comerciales o residenciales con pocos recursos, identificadas mediante teledetección como aquellas con una alta densidad de estructuras en gris, estuvieron asociadas a una menor ocurrencia de la LVC (OR = 0,09; IC95%: 0,01-0,92). La mayor prevalencia de infección en perros, conviviendo con otros animales silvestres y en áreas con una mayor superficie vegetal, se asocia con una menor prevalencia en áreas urbanizadas, lo que indica un padrón rural de transmisión de la LVC en ese área.

Abstract: The study assessed the association between environmental characteristics obtained by remote sensing and prevalence of canine visceral leishmaniasis (CVL) in the neighborhood of Jacaré, an area with recent introduction of the disease in the municipality (county) of Niterói, Rio de Janeiro State, Brazil. This was a cross-sectional study to assess CVL prevalence, defined as a positive result in the dual path platform (DPP) rapid immunochromatographic assay, confirmed by immunoenzymatic assay (IEA). The study included 97 dogs, with 21.6% CVL prevalence. CVL prevalence was higher in dogs with contact with another dog, opossum, marmoset, or hedgehog, as well as history of culling of other dogs with CVL from the household. In the multivariate analysis, adjusted for the dog's sex and age, dogs in areas with sparse vegetation showed fivefold higher prevalence of Leishmania infantum infection compared to dogs in areas with less vegetation (OR = 5.72; 95%CI: 1.47-22.20). Meanwhile, less urbanized areas, characterized as commercial or low-income residential areas, identified by remote sensing as those with high density of gray structures, were associated with lower CVL prevalence (OR = 0.09; 95%CI: 0.01-0.92). The higher prevalence of infection in dogs living alongside wild animals and in areas with more vegetation and lower prevalence in more urbanized areas suggest a rural transmission pattern for CVL in this area.

Dificuldades operacionais no uso de coleiras caninas impregnadas com inseticida para o controle da leishmaniose visceral, Montes Claros, MG, 2012 / Dificultades operativas en el uso de collares impregnados con insecticida para el control de la leishmaniasis visceral, municipio de Montes Claros, MG, Brasil, 2012 / Operational difficulties in the use of insecticidal dog collars for the control of visceral leishmaniasis, municipality of Montes Claros, MG, Brazil, 2012

Objetivo: descrever dificuldades operacionais na implementação de coleiras caninas impregnadas com deltametrina para o controle da leishmaniose visceral. Métodos: estudo de intervenção comunitária no município de Montes Claros, MG, Brasil, comparando (i) área-controle - sem encoleiramento canino - e (ii) área de intervenção - uso de coleiras caninas impregnadas com deltametrina 4%; foi realizado inquérito sorológico inicial, seguido de três outros ciclos (aos 12, 18 e 24 meses). Resultados: de 4.388 cães inicialmente soronegativos encoleirados, 36,9% não foram encontrados no segundo ciclo, 27,0% foram perdidos por sumiço/doação/venda e 22,6% porque a casa estava fechada; a perda de coleiras foi de 56,1% em um ano; entre os cães que permaneceram mais tempo no estudo, a perda foi menor. Conclusão: as altas frequências de perda de coleiras e de domicílios fechados são dificuldades operacionais para a implementação de um programa de controle baseado na estratégia avaliada.

Objetivo: describir las dificultades operativas en la implementación de los collares impregnados con deltametrina para el control de la leishmaniasis visceral. Métodos: ensayo comunitario de intervención en la municipalidad de Montes Claros, MG, Brasil, comparando (i) área control - perros sin collares - y (ii) área de intervención - uso de collares impregnados con deltametrina 4% -; se realizó una encuesta serológica inicial, seguida de otros tres ciclos (a los 12, 18 y 24 meses). Resultados: de 4.388 perros inicialmente seronegativos y con los collares, 36,9% no participaron del segundo ciclo, 27,0% se perdieron por desaparición/donación/venta y 22,6% porque el domicilio estaba cerrado; la pérdida de los collares fue del 56,1% en un año; entre los perros que permanecieron más tiempo en estudio, la pérdida fue menor. Conclusión: alta frecuencia de pérdida de los collares y de domicilios cerrados son dificultades operativas para la implementación de un programa nacional de control basado en la estrategia evaluada.

Objective: to describe operational difficulties in the implementation of deltamethrin-impregnated dog collars for the control of visceral leishmaniasis. Methods: this was a community intervention trial in the municipality of Montes Claros, MG, Brazil, comparing (i) control area - dogs without dog collars - and (ii) intervention area - use of 4% deltamethrin-impregnated collars; an initial serological survey was performed, followed by three further cycles (at 12, 18 and 24 months). Results: out of 4,388 dogs initially seronegative wearing collars, 36.9% were not found in the second cycle, 27.0% of them were lost owing to disappearance/given away/sale, and 22.6% because no one was at home; 56.1% of collars were lost in one year; while among dogs that stayed longer in the study, collar loss was lower. Conclusion: high frequencies of collar loss and no one being at home at the time of the visit are operational difficulties for the implementation of a national control program based on the strategy evaluated.

Validation of the Dual-path Platform chromatographic immunoassay (DPP® CVL rapid test) for the serodiagnosis of canine visceral leishmaniasis

BACKGROUND Visceral leishmaniasis is a major public health challenge in South America, and dogs are its main urban reservoir. OBJECTIVE Validation of the canine Dual-path Platform immunoassay for canine visceral leishmaniasis (DPP® CVL) for a sample set composed of 1446 dogs from different Brazilian endemic areas. METHODS A well-defined reference standard by means of parasitological culture, immunohistochemistry, and histopathology was used. Animals were classified as asymptomatic, oligosymptomatic, or symptomatic. Sensitivity and specificity were assessed as a single set and in clinical groups. A reproducibility assessment of the tests was conducted using the Kappa (κ) index at three different laboratories (A, B, and C). FINDINGS Overall, 89% sensitivity and 70% specificity were obtained for the entire sample set. Analysis of the clinical groups showed a gradual decrease in the sensitivity and an increase in the specificity with the reduction of clinical signs in the dogs that were assessed, reaching a sensitivity of 75% (42.8-94.5%) among asymptomatic dogs and lower specificity of 56% (46.2-66.3%) among symptomatic dogs. Inter-laboratory agreement was substantial (κAB= 0.778; κAC= 0.645; κCB= 0.711). MAIN CONCLUSIONS The test performance is somewhat dependent on canine symptomatology, but such influence was less evident than in previous studies. Favourable results for sensitivity and specificity can be obtained even in asymptomatic animals; however, caution is needed in these evaluations, and the results suggest that the immunochromatographic test may be further improved for better investigation in asymptomatic dogs. The results obtained confirm the usefulness of DPP® CVL for application in serological surveys.

Can vaccines against canine visceral leishmaniasis interfere with the serological diagnostics recommended by the Brazilian Ministry of Health? / Vacinas anti-leishmaniose visceral canina podem interferir no diagnóstico sorológico preconizado pelo Ministério da Saúde brasileiro?

ABSTRACT: The objective of the current research was to assess seroconversion in dogs immunized with Leishmune® and Leish Tec® vaccines using rapid chromatographic immunoassay DPP® (Dual Path Platform) (DPP CVL) and enzyme immunoassay (EIE) up to one year after the vaccination protocol. The study sample comprised 28 dogs divided into two groups, each group immunized with an anti-CVL vaccine and clinically monitored for one year through clinical evaluation and laboratory tests. 22 (78.5%) dog were monitored. During the evaluation time (T1-30 days, T2-6 months, and T3-1 year after vaccination) the results for all dogs were negative for CVL, except for one animal vaccinated with Leish tec® that seroconverted in the DPP CVL test at T2. Subsequent examinations of this dog were negative. Our results showed that in a non-endemic area, even at different evaluation times, dogs vaccinated against CVL with Leishmune® or Leish tec® did not seroconvert in the serological protocol used by the Brazilian Ministry of Health (DPP/EIE).

RESUMO: O objetivo deste trabalho foi avaliar a soroconversão em cães imunizados com as vacinas Leishmune® e Leish tec®, através do teste imunocromatográfico rápido DPP® (Dual Path Platform) (DPP LVC) e do ensaio imunoenzimático (EIE) durante um ano após o protocolo vacinal. Trata-se de um estudo onde 28 cães divididos em dois grupos foram imunizados cada um com uma vacina anti - LVC e acompanhados durante um ano através de avaliação clínica e exames laboratoriais. Foi possível acompanhar 22 (78.5%) cães. Nos exames dos tempos 1, 2 e 3 (respectivamente 30 dias, 6 messes e 1 ano após a vacinação) os resultados de todos os cães também foram negativos para LVC, exceto de um cão que recebeu a vacina Leish tec® e soroconverteu no DPP LVC no T2, após 6 meses a vacina. Os exames posteriores deste cão foram negativos. Os resultados do presente estudo demostraram que, em área não endêmica e mesmo em diferentes tempos de avaliação, cães vacinados contra LVC, independente da vacina utilizada, não foram capazes de soroconverter no protocolo utilizado pelo Ministério da Saúde brasileiro (DPP/EIE).

Sensitivity and specificity of parallel or serial serological testing for detection of canine Leishmania infection

In Brazil, human and canine visceral leishmaniasis (CVL) caused byLeishmania infantum has undergone urbanisation since 1980, constituting a public health problem, and serological tests are tools of choice for identifying infected dogs. Until recently, the Brazilian zoonoses control program recommended enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) and indirect immunofluorescence assays (IFA) as the screening and confirmatory methods, respectively, for the detection of canine infection. The purpose of this study was to estimate the accuracy of ELISA and IFA in parallel or serial combinations. The reference standard comprised the results of direct visualisation of parasites in histological sections, immunohistochemical test, or isolation of the parasite in culture. Samples from 98 cases and 1,327 noncases were included. Individually, both tests presented sensitivity of 91.8% and 90.8%, and specificity of 83.4 and 53.4%, for the ELISA and IFA, respectively. When tests were used in parallel combination, sensitivity attained 99.2%, while specificity dropped to 44.8%. When used in serial combination (ELISA followed by IFA), decreased sensitivity (83.3%) and increased specificity (92.5%) were observed. Serial testing approach improved specificity with moderate loss in sensitivity. This strategy could partially fulfill the needs of public health and dog owners for a more accurate diagnosis of CVL.

IDENTIFICATION OF CANINE VISCERAL LEISHMANIASIS IN A PREVIOUSLY UNAFFECTED AREA BY CONVENTIONAL DIAGNOSTIC TECHNIQUES AND CELL-BLOCK FIXATION

After the report of a second case of canine visceral leishmaniasis (CVL) in São Bento da Lagoa, Itaipuaçu, in the municipality of Maricá, Rio de Janeiro State, an epidemiological survey was carried out, through active search, totaling 145 dogs. Indirect immunofluorescence assay (IFA), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and rapid chromatographic immunoassay based on dual-path platform (DPP(r)) were used to perform the serological examinations. The parasitological diagnosis of cutaneous fragments was performed by parasitological culture, histopathology, and immunohistochemistry. In the serological assessment, 21 dogs were seropositive by IFA, 17 by ELISA, and 11 by DPP(r), with sensitivity of 66.7%, 66.7% and 50%, and specificity of 87.2%, 90.2% and 94%, respectively for each technique. The immunohistochemistry of bone marrow using the cell-block technique presented the best results, with six positive dogs found, three of which tested negative by the other parasitological techniques. Leishmania sp. was isolated by parasitological culture in three dogs. The detection of autochthonous Leishmania infantum in Itaipuaçu, and the high prevalence of seropositive dogs confirm the circulation of this parasite in the study area and alert for the risk of expansion in the State of Rio de Janeiro.

Canine viscerall leishmaniasis case investigation in the Jacare region of Niteroi, Rio de Janeiro, Brazil / Investigação de caso de leishmaniose visceral canina na região do Jacaré, município de Niterói, Rio de Janeiro, Brasil

SUMMARYAmerican visceral leishmaniasis is a vector-borne zoonosis in expansion in Brazil. Dogs are the main urban reservoir. Departing from a case of canine visceral leishmaniasis (CVL) in Jacaré, Niterói, Rio de Janeiro State, an epidemiological canine and entomological study was performed to assess the extension of the disease at the location. Sample was collected around the case and the dogs identified by serological tests (rapid double platform immunochromatographic exams, immunoenzymatic assay/ELISA, indirect immunofluorescence/IFAT). The parasitological diagnosis was performed in animals positive in at least one of these tests. The entomological study was carried out by using light traps and manual collection. The associations between canine variables and outcome (ELISA and IFAT reagents) were assessed by the chi-square test and adjusted by multivariate logistic regression for those associations with p < 0.1 in the bivariate analysis. Seventeen cases of CVL were detected among 110 evaluated dogs (prevalence of 15.5%). Presence of ectoparasites (OR 6.5; 95% CI 1.1-37.4), animals with clinical signs (OR 9.5; 95% CI 1.2-76.6), and previous cases of CVL in the same house (OR 17.9; 95% CI 2.2-147.1) were associated with the outcome. Lutzomyia longipalpiswas not detected. Our results are indicative of an ongoing transmission in the area.

RESUMOA leishmaniose visceral americana é zoonose em expansão no Brasil com transmissão vetorial, onde o cão é o principal reservatório urbano. Partindo de um caso canino da doença no Jacaré, Niterói/RJ, realizouse inquérito epidemiológico canino e levantamento entomológico para avaliar a extensão da enfermidade na localidade. As amostras foram coletadas ao redor do caso e os cães identificados por testes sorológicos (teste rápido de imunocromatografia em dupla plataforma, ensaio imunoenzimático/ELISA, reação de imunofluorescência indireta/RIFI). O diagnóstico parasitológico foi realizado nos animais reagentes em ao menos um desses exames. O levantamento entomológico foi feito com armadilhas luminosas e coleta manual. As associações entre variáveis caninas coletadas e o desfecho (ELISA e RIFI reagentes) foram avaliadas pelo teste qui-quadrado e ajustadas pela regressão logística multivariada para variáveis com p< 0,1 na análise bivariada. Foram detectados 17 casos de LVA entre os 110 cães avaliados (prevalência de 15,5%). Presença de ectoparasitas (OR 6,5; 95% IC 1,1-37,4), animais com sinais clínicos (OR 9,5; 95% IC 1,2-76,6) e casos prévios de LVA canina na residência (OR 17,9; 95% IC 2,2-147,1) foram associados ao desfecho. Não foi detectada Lutzomyia longipalpis. Nossos resultados indicam situação de transmissão contínua na área.

Serological survey of cases of canine visceral leishmaniasis and evaluation of phlebotomine fauna on Marambaia Island, municipality of Mangaratiba, Rio de Janeiro state, Brazil* / Levantamento sorológico de casos de leishmaniose visceral canina e avaliação da fauna de flebotomíneos na Ilha da Marambaia, município de Mangaratiba, estado do Rio de Janeiro, Brasil

The state of Rio de Janeiro is epidemiologically classified as a region of low incidence for American visceral leishmaniasis (AVL); however, endemic areas have expanded dramatically in recent years. In 2009 and 2010, autochthonous cases of AVL were reported in the municipality of Maricá and in the neighborhood of Laranjeiras in the city of Rio de Janeiro, respectively. In 2006, samples isolated in infected animals in the coastal area of the municipality of Mangaratiba were characterized as L. (L.) chagasi. In 2002, on Marambaia Island, located in Mangaratiba, only cases of American cutaneous leishmaniasis (ACL) were recorded. This study aimed to reassess the prevalence of CVL and identify the phlebotomine fauna on Marambaia Island, Mangaratiba, in 2012. To this end, a canine serological survey was carried out using IFA, ELISA and DPP techniques. In addition, phlebotomi were captured with the help of light traps, HP type. The census totaled 116 dogs, and 17 animals tested positive with prevalence of 14.6%. From April to November 2012, 2,524 sandfly specimens of nine different species were captured. We observed the maintenance of CVL prevalence in the region, as well as the presence of the Lutzomyia longipalpis vector.

O estado do Rio de Janeiro é classificado epidemiologicamente como uma região de baixa incidência de leishmaniose visceral americana (LVA), no entanto, áreas endêmicas têm se expandido drasticamente nos últimos anos. Em 2009 e 2010, foram notificados casos autóctones de LVA no município de Maricá e no bairro de Laranjeiras, na cidade de Rio de Janeiro, respectivamente. Em 2006, em amostras de animais infectados no litoral do município de Mangaratiba foram isoladas e caracterizadas L. (L.) chagasi. Em 2002, na Ilha da Marambaia, localizada em Mangaratiba, foram registrados apenas os casos de leishmaniose tegumentar americana (LTA). Este estudo teve como objetivo avaliar a prevalência da LVC e identificar a fauna de flebotomíneos na Ilha da Marambaia, Mangaratiba, em 2012. Para este fim, um inquérito sorológico canino foi realizado utilizando as técnicas IFA, ELISA e DPP. Além disso, foram capturados flebótomos com a ajuda de armadilhas luminosas, tipo HP. O censo totalizou 116 cães e 17 animais foram positivos com a prevalência de 14,6%. Entre abril e novembro de 2012, foram capturados, nove espécies diferentes flebotomíneos, um total de 2.524 espécimes. Observou-se a manutenção da LVC prevalência na região, bem como a presença do vetor Lutzomyia longipalpis.

First autochthonous case of canine visceral leishmaniasis in Volta Redonda, Rio de Janeiro, Brazil / Primeiro caso autóctone de leishmaniose visceral canina em Volta Redonda, Rio de Janeiro, Brasil

In Brazil, American visceral leishmaniasis (AVL) is caused by Leishmania (Leishmania) chagasi and its main vector is Lutzomyia longipalpis. Cases of canine visceral leishmaniasis (CVL) in non-endemic areas have been reported over the last few years throughout the country. The objective of this research note is to describe an autochthonous case of CVL that occurred in the municipality of Volta Redonda, state of Rio de Janeiro, an area where the disease is not endemic, alerting veterinarians and the scientific community to the expansion of this important zoonosis and advising veterinary practitioners on how to deal with a suspicion of CVL. Canine visceral leishmaniasis can be misdiagnosed within a broad spectrum of canine diseases based on clinical and laboratory findings. Therefore, knowledge of its clinical manifestations, specific and sensitive laboratory diagnostic tests and parasitological procedures are of the utmost importance for rapid confirmation and notification of a case, thus contributing directly to the control of a focus.

No Brasil a leishmaniose visceral americana (LVA) é causada por Leishmania (Leishmania) chagasi e tem como seu principal vetor Lutzomyia longipalpis. Nos últimos anos vêm sendo relatados casos de leishmaniose visceral canina (LVC) em áreas não endêmicas em todo país. O objetivo desta nota é descrever um caso autóctone de LVC no município de Volta Redonda, Estado do Rio de Janeiro, área não endêmica para essa doença e assim, chamar a atenção dos clínicos veterinários e da comunidade científica para a expansão dessa importante zoonose, além de orientar os médicos veterinários, como proceder frente a um caso suspeito de LVC. A LVC pode ser clínica e laboratorialmente confundida com uma ampla gama de patologias caninas e o conhecimento de suas manifestações clínicas e de procedimentos laboratoriais específicos e sensíveis para esse diagnóstico, são de grande importância para uma rápida confirmação e notificação do caso, contribuindo assim diretamente para o controle do foco.

Leishmania (Leishmania) hertigi in a porcupine (Coendou sp. ) found in Brasília, Federal District, Brazil / Leishmania (Leishmania) hertigi em porco-espinho (Coendou sp. ) encontrado em Brasília, Distrito Federal, Brasil

Studies report the occurrence of Leishmania (Leishmania) hertigi in northern states of Brazil. In the present investigation, we describe the isolation of L. (L.) hertigi from a porcupine (Coendou sp.) found in Brasília, Federal District, center-west region of Brazil. During a study on canine visceral leishmaniasis conducted in the city of Brasília, Federal District, a porcupine was found dead on a public road. The animal was identified and fragments of intact skin and spleen were collected for isolation of parasite in the culture. This report of the occurrence of L. hertigi in another part of Brazil may help establish the distribution of this parasite in the country. Further studies are needed to better understand the role of L. hertigi in the pathology and pathogenesis of leishmaniasis and its survival in mammals and possible vectors.

Alguns estudos relatam o encontro de Leishmania (Leishmania) hertigi em estados da região Norte do Brasil. Na presente investigação, os autores descrevem o isolamento de Leishmania (Leishmania) hertigi em um porco-espinho (Coendou sp.) encontrado em Brasília, Distrito Federal, região Centro-oeste do Brasil. Durante um estudo de leishmaniose visceral canina conduzido na cidade de Brasília, Distrito Federal, um porco-espinho foi encontrado morto em via pública. O animal foi identificado e fragmentos de pele íntegra e baço foram coletados para isolamento do parasito em cultura. Esse relato da ocorrência de L. hertigi em outra região do Brasil pode contribuir para evidenciar a distribuição desse parasita no país. Vale ressaltar a necessidade de estudos para compreensão do papel L. hertigi na patologia e patogênese da leishmaniose e a sua sobrevivência em mamíferos e possíveis vetores.

Canine visceral leishmaniasis: seroprevalence and risk factors in Cuiabá, Mato Grosso, Brazil / Leishmaniose visceral canina: soroprevalência e fatores de risco em Cuiabá, Mato Grosso, Brasil

In Brazil, canine visceral leishmaniasis (CVL) is endemic and the number of cases in humans and dogs has increased in the Midwest region. A transversal study was carried out in endemic areas from Cuiabá, State of Mato Grosso, to assess data on seroprevalence and risk factors associated to canine infection. Four hundred and thirty (430) dogs were randomly evaluated through indirect fluorescence antibody test (IFAT) considering variables related to the animals, the environment and the knowledge by owners on CVL aspects and control. From 430 dogs, 95 (22.1%) were seroreagent for leishmaniasis and animals living in rural environments present risk 1.9 times higher for acquiring the disease than those in urban environments (p = 0.01; OR 1.9). Factors related to animals' habits, such as free access to the street and guard function were considered indicators to predict infection by Leishmania sp. (p < 0.05) by statistical univariate analysis. The presence of agricultural activities was also a fact that contributed for the insurgence of the infection (p = 0.02; OR 1.68). The results contributed to the knowledge on the aspects of CVL in Cuiabá and point to an urgent need to include educational and sanitary programs in the city, since the region presents favorable characteristics for spreading the infection of CVL as already observed in other Brazilian cities.(AU)

No Brasil, a leishmaniose visceral canina (CLV) é endêmica e, na região Centro-Oeste, o número de casos em humanos e cães tem aumentado. Um estudo transversal foi realizado em áreas endêmicas de Cuiabá (MT) com objetivo de avaliar dados sobre a soroprevalência e determinar os fatores de risco associados à infecção canina. Quatrocentos e trinta (430) cães foram aleatoriamente avaliados pelo teste de imunofluorescência indireta, considerando-se variáveis relacionadas aos animais, o ambiente e o conhecimento por parte dos proprietários sobre aspectos da CLV e seu controle. Dos 430 cães, 95 (22,1%) apresentaram-se soros reagentes para leishmaniose, e os animais que viviam em ambiente rural apresentaram risco 1,9 vezes maior de adquirir a infecção dos que aqueles em ambiente urbano (p = 0,01; OR 1,9). Fatores relacionados aos hábitos dos animais, tais como o livre acesso à rua e função de guarda, foram considerados indicadores para prever a infecção por Leishmania sp. (p.< 0,05) em análise estatística univariada. A presença de atividade agrícola foi também um fato que contribuiu para a ocorrência da infecção (p = 0,02; OR 1,68). Os resultados contribuem para o conhecimento sobre os aspectos da CVL em Cuiabá e apontam para uma necessidade urgente de incluir ações educativas e sanitárias na cidade, já que a região possui características favoráveis para a dispersão da doença como já observado em outras cidades.(AU)

Evaluation of Leishmania (Leishmania) chagasi strains isolated from dogs originating from two visceral leishmaniasis-endemic areas in Brazil using multilocus enzyme electrophoresis / Avaliação de amostras de Leishmania (Leishmania) chagasi isoladas de cães oriundos de duas áreas endêmicas de leishmaniose visceral no Brasil através da eletroforese de isoenzimas

INTRODUCTION: Domestic dogs are the most important reservoir in the peridomestic transmission cycle of Leishmania (Leishmania) chagasi. The genetic variability of subpopulations of this parasite circulating in dogs has not been thoroughly analyzed in Brazil, even though this knowledge has important implications in the clinical-epidemiological context. METHODS: The objective of this study was to evaluate and compare the phenotypic variability of 153 L. chagasi strains isolated from dogs originating from the municipalities of Rio de Janeiro (n = 57) and Belo Horizonte (n = 96), where the disease is endemic. Strains isolated only from intact skin were selected and analyzed by multilocus enzyme electrophoresis using nine enzyme systems (6PG, GPI, NH1 and NH2, G6P, PGM, MDH, ME, and IDHNADP). RESULTS: The electrophoretic profile was identical for all isolates analyzed and was the same as that of the L. chagasi reference strain (MHOM/BR/74/PP75). Phenetic analysis showed a similarity index of one for all strains, with the isolates sharing 100 percent of the characteristics analyzed. CONCLUSIONS: The results demonstrate that the L. chagasi populations circulating in dogs from Rio de Janeiro and Belo Horizonte belong to a single zymodeme.

INTRODUÇÃO: Cães domésticos são considerados os reservatórios mais importantes no ciclo peridoméstico de transmissão de Leishmania (Leishmania) chagasi. No entanto, a variabilidade genética de sub-populações que circulam neste hospedeiro é ainda pouco explorada no Brasil, sendo tal conhecimento de grande importância no contexto clínico-epidemiológico. MÉTODOS: O objetivo deste estudo foi avaliar e comparar a variabilidade fenotípica de 153 amostras de L. chagasi isoladas de cães oriundos dos municípios do Rio de Janeiro (n = 57) e Belo Horizonte (n = 96), onde a doença é endêmica. Foram selecionadas somente amostras isoladas de pele íntegra e analisadas por eletroforese de isoenzimas (MLEE) empregando nove sistemas enzimáticos (6PG, GPI, NH1 e NH2, G6P, PGM, MDH, ME, IDHNADP). RESULTADOS: Todas as amostras analisadas apresentaram perfil eletroforético idêntico entre si e com a amostra de L. chagasi utilizada como referência neste estudo (MHOM/BR/74/PP75). A análise fenética demonstrou índice de similaridade igual a um para todas as amostras, revelando um compartilhamento de 100 por cento dos caracteres avaliados. CONCLUSÕES: A partir desses resultados, podemos inferir que as populações de L. chagasi que estão circulando nos cães do Rio de Janeiro e Belo Horizonte podem ser agrupadas em um único zimodema.

Relato de caso autóctone de leishmaniose visceral canina na zona sul do município do Rio de Janeiro / Report on an autochthonous case of canine visceral leishmaniasis in the southern zone of the municipality of Rio de Janeiro

O Brasil enfrenta uma expansão e urbanização da leishmaniose visceral americana com casos humanos e caninos em várias cidades de grande porte. O presente relato descreve um caso de leishmaniose visceral canina autóctone em uma área não endêmica no município de Rio de Janeiro.

Brazil is facing expansion and urbanization of American visceral leishmaniasis, with human and canine cases in several large-sized cities. This report describes an autochthonous case of canine visceral leishmaniasis in a nonendemic area in the municipality of Rio de Janeiro.

Avaliação sorológica para detecção de anticorpos anti-Leishmania em cães e gatos no bairro de Santa Rita de Cássia, Município de Barra Mansa, Estado do Rio de Janeiro / Serological evaluation for detection of anti-Leishmania antibodies in dogs and cats in the district of Santa Rita de Cássia, municipality of Barra Mansa, State of Rio de Janeiro

A partir de um caso canino de leishmaniose tegumentar americana na localidade de Santa Rita de Cássia, município de Barra Mansa, Rio de Janeiro, foi realizado um inquérito sorológico em 177 cães e 43 gatos. Na avaliação das amostras de soros caninos, 10 por cento foram positivos na reação de imunofluorescência indireta e 10,7 por cento no ensaio imunoenzimático. Entre as amostras de soros felinos testados, nenhum animal foi positivo na reação de imunofluorescência indireta e apenas um (2,4 por cento) felino apresentou reação positiva ao ensaio imunoenzimático. A detecção de Leishmania braziliensis, autóctone em Barra Mansa, faz um alerta para a instalação de um possível foco de leishmaniose tegumentar americana nessa região.

From a canine case of american cutaneous leishmaniasis in the locality of Santa Rita de Cássia, municipality of Barra Mansa, Rio de Janeiro, a serological survey was performed on 177 dogs and 43 cats. Evaluation of the canine serum samples showed that 10 percent had a positive reaction in the indirect immunofluorescence test and 10.7 percent in the enzyme-linked immunosorbent assay. Among the feline serum samples tested, none of the animals had a positive reaction in the indirect immunofluorescence test and only one (2.4 percent) showed a positive reaction in the enzyme-linked immunosorbent assay. The detection of an autochthonous case of Leishmania braziliensis in Barra Mansa gives warning that a focus of american cutaneous leishmaniasis is possibly becoming established in this region.

Leishmaniose visceral canina em Maricá, Estado do Rio de Janeiro: relato do primeiro caso autóctone / Canine visceral leishmaniasis in Maricá, State of Rio de Janeiro: first report of an autochthonous case

Leishmaniose visceral é uma zoonose de importância em Saúde Pública, onde os cães representam um dos maiores problemas. Este trabalho visa relatar o primeiro caso autóctone da leishmaniose visceral canina no município de Maricá, fornecendo elementos relacionados à distribuição geográfica de Leishmania (Leishmania) chagasi no Estado do Rio de Janeiro.

Visceral leishmaniasis is a zoonosis of public health importance, and dogs represent one of the main problems. This paper describes the first autochthonous case of canine visceral leishmaniasis in the municipality of Maricá. It provides new facts regarding the geographical distribution of Leishmania (Leishmania) chagasi in the State of Rio de Janeiro.

Identificar a permanência de cães infectados por Leishmania (Leishmania) chagasi em área endêmica, após inquérito sorológico realizado no município do Rio de Janeiro / Identify the permanence of dogs infected by Leishmania (Leishmania) chagasi in an endemic area, after serological survey conducted in the city of Rio de Janeiro

A Leishmaniose Visceral Americana (LVA) representa um importante problema em saúde pública para o Brasil, sendo o cão doméstico a principal fonte de infecção para o vetor. O objetivo deste estudo foi identificar a permanência de cães infectados por Leishmania (Leishmania) chagasi em área endêmica, após inquérito sorológico realizado no Município do Rio de Janeiro, utilizando amostras coletadas em papel filtro (eluato) e processadas pela técnica de imunofluorescência indireta (IFI). Inicialmente realizou-se inquérito em área endêmica para seleção dos animais soronegativos. Cães domiciliados foram submetidos a: 1) exame clínico; 2) coleta de sangue (soro e papel filtro) para a realização das técnicas de ensaio imunoenzimático (EIE), IFI e reação em cadeia da polimerase (PCR); e 3) biópsia de pele para o exame parasitológico (cultura), histopatológico e imunohistoquímico. Os resultados são apresentados em dois manuscritos submetidos para publicação: o primeiro descreve os resultados obtidos do inquérito realizado na região de Carapiá, onde 305 cães foram avaliados. L. (L.) chagasi foi isolada de nove animais, resultando em uma prevalência de 3 por cento. Nos testes sorológicos a sensibilidade e especificidade foram, respectivamente, 100 por cento e 96,6 por cento para a EIE; 100 por cento e 65,5 por cento para a IFI utilizando o ponto de corte de 1:40, titulação empregada pelo Ministério da Saúde para o controle da LVA; 100 por cento e 83,4 por cento para a IFI com ponto de corte de 1:80; e de 22,2 por cento e 97,0 por cento para a IFI em papel filtro. As razões de verossimilhança (RV) para os resultados positivos foram de 29, 4 no EIE, 2,98 na IFI 1:40, 6,02 na IFI 1:80 e 7,4 na IFI em papel filtro. No segundo manuscrito, apresenta-se o resultado da avaliação clínica e laboratorial de 146 cães negativos IFI em papel filtro selecionados aleatoriamente. Nesse grupo, encontrou-se uma soroprevalência de 34,9 por cento e 6,8 por cento às técnicas de IFI 1:40 e EIE, respectivamente. Foi possível isolar L. (L.) chagasi de cinco cães, demonstrando que a IFI em papel filtro, empregada na triagem dos animais, não permitiu identificar estes cães infectados. Os resultados apresentados demonstram que cães infectados possam estar permanecendo nas áreas endêmicas, dando continuidade ao ciclo da doença.

Avaliação da ocorrência das leishmanioses em cães e gatos domésticos, correlacionados aos casos humanos residentes em área endêmica do município do Rio de Janeiro / Evaluation of the occurrence of leishmaniasis in domestic dogs and cats, human cases related to residents in endemic areas of Rio de Janeiro

Foi realizada busca ativa de cães e gatos nos domicílios dos casos índices humanos de leishmaniose tegumentar americana (LTA) e nos domicílios vizinhos mais próximos, localizados na área da Serra do Mendanha, município do Rio de Janeiro. Durante um ano de estudo, foram visitados 62 domicílios, dos quais em 22 havia casos humanos índices de LTA e 40 domicílios, dos quais em 22 havia casos habitantes, dos quais 22 haviam sido atendidos no IPEC – Fiocruz entre os anos de 2002 e 2004 e 12 relataram história anterior de LTA. Em 14 dos 52 cães e em três dos 42 gatos estudados, Leishmania sp. foi observada no isolamento e/ou visualizada no esfregaço por aposição. Nesses animais predominaram lesões ulceradas em 11 cães e quatro gatos. Daqueles que houve isolamento da Leishmania sp., em nove cães e três gatos os parasitas apresentaram perfis eletroforéticos similares a cepa referência de Leishmania (Viannia ) braziliensis e em um cão apresentou perfil similar a cepa referência de Leishmania (Leishamania) chagasi. Formas amastigotas foram visualizadas nos tecidos através do exame histopatológico em três de 26 cães e dois dos quatro felinos que apresentavam lesões cutâneas. Nos exames micológicos não foram isolados fungos patogênicos e nas analises hematológicas e bioquímicas não foram encontradas alterações pertinentes. Anticorpos IgG anti-Leishmania foram obervados no soro de 22 de 50 cães pela técnica de imunoflorescência indireta (IFI). ). Não foram observados anticorpos anti-FIV e antígenos de FeLV nos felinos com LTA. Através dos resultados obtidos, foi possível concluir que o número de casos de LTA em gatos domésticos encontrados na região estudada foi elevado considerando a raridade da doença. A maior ocorrência de LTA em cães e gatos em área de casos humanos, pode estar relacionada à proximidade dos domicílios ao meio ambiente silvestre. Não foi encontrada correlação entre as residências com casos humanos e animais infectados por Leishmania (V.) braziliensis.